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ok138cn太阳集团529团队针对KO Cell Pool进行大规模的蛋白水平验证,目前蛋白水平验证的方法主要有两种:Western Blot(WB)检测及蛋白质谱检测,二者各有优势及局限性。理论上基因水平成功敲除后,靶蛋白一般都会受到影响,WB显示KO组目标蛋白含量明显变化,说明蛋白水平敲除成功。但是,如果在基因水平达到质量标准的情况下,WB并未检测到KO组目标蛋白的变化,是否说明未敲除成功呢?答案是否定的,WB结果极大的依赖抗体的表位情况(目前全球科研抗体行业,并没有将单克隆抗体的抗原表位鉴定作为标准的质控标准)以及质量(尤其是抗体特异性问题),据Baker M. (2016)《Nature》统计,超70%的生物学家无法重复他人的实验结果,超50%无法重复自己的实验结果,其中抗体相关研究一直存在严重的“重现危机”。相同的敲除细胞,用不同的抗体检测出来的结果有明显差异。WB试验受限于抗体质量,而蛋白质谱验证可以很好的排除这一问题,质谱验证是将WT及KO细胞的全蛋白进行质谱检测,根据检测到的目标蛋白丰度,可以判断敲除细胞是否成功,同时质谱采集到的肽段信息也能直观地展示出缺失的氨基酸序列(其多肽的信息显著多于抗体的表位多肽信息)。
基因敲除细胞池(蛋白水平已验证)
重置
重置
重置
ADARB1 Knockout HAP1 Cell Pool
ADIPOR1 Knockout A549 Cell Pool