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ok138cn太阳集团529团队针对KO Cell Pool进行大规模的蛋白水平验证,目前蛋白水平验证的方法主要有两种:Western Blot(WB)检测及蛋白质谱检测,二者各有优势及局限性。理论上基因水平成功敲除后,靶蛋白一般都会受到影响,WB显示KO组目标蛋白含量明显变化,说明蛋白水平敲除成功。但是,如果在基因水平达到质量标准的情况下,WB并未检测到KO组目标蛋白的变化,是否说明未敲除成功呢?答案是否定的,WB结果极大的依赖抗体的表位情况(目前全球科研抗体行业,并没有将单克隆抗体的抗原表位鉴定作为标准的质控标准)以及质量(尤其是抗体特异性问题),据Baker M. (2016)《Nature》统计,超70%的生物学家无法重复他人的实验结果,超50%无法重复自己的实验结果,其中抗体相关研究一直存在严重的“重现危机”。相同的敲除细胞,用不同的抗体检测出来的结果有明显差异。WB试验受限于抗体质量,而蛋白质谱验证可以很好的排除这一问题,质谱验证是将WT及KO细胞的全蛋白进行质谱检测,根据检测到的目标蛋白丰度,可以判断敲除细胞是否成功,同时质谱采集到的肽段信息也能直观地展示出缺失的氨基酸序列(其多肽的信息显著多于抗体的表位多肽信息)。
基因敲除细胞池(蛋白水平已验证)
重置
重置
重置
ALDH16A1 Knockout A549 Cell Pool
ALDH16A1 Knockout HAP1 Cell Pool
ALDH18A1 Knockout A549 Cell Pool
ALDH18A1 Knockout HAP1 Cell Pool
ALDH18A1 Knockout HCT116 Cell Pool
ALDH1A1 Knockout A549 Cell Pool
ALDH7A1 Knockout A549 Cell Pool
ALKBH3 Knockout HAP1 Cell Pool
ALKBH5 Knockout HBL-1 Cell Pool