产品分类
hTERT-RPE1_mCherry/EGFP细胞zFYVE27/RTN2a基因C端原位插入EGFP /mCherry标签
- 产品描述
- 参数
- 自定义tab1
- 自定义tab2
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- 品牌: HUAWEI P50 Pro
- 商品名称: 【搭载HarmonyOS 2】HUAWEI P50 Pro 4G全网通 原色双影像单元 麒麟9000芯片 万象双环设计 8GB+256GB曜金黑手机
- 商品编号: 234567895678
- 上市月份: 官网信息为主
- 商品毛重: 350.00g
- 商品产地: 中国大陆
- 系统: HarmonyOS 2
- 支持IPv6: 支持IPv6
京东价：京东价为商品的销售价，是您最终决定是否购买商品的依据。
京东价：京东价为商品的销售价，是您最终决定是否购买商品的依据。 划线价：商品展示的划横线价格为参考价，并非原价，该价格可能是品牌专柜标价、商品吊牌价或由品牌供应商提供的正品零售价（如厂商指导价、建议零售价等）或其他真实有依据的价格；由于地区、时间的差异性和市场行情波动，品牌专柜标价、商品吊牌价等可能会与您购物时展示的不一致，该价格仅供您参考。折扣：如无特殊说明，折扣指销售商在原价、或划线价（如品牌专柜标价、商品吊牌价、厂商指导价、厂商建议零售价）等某一价格基础上计算出的优惠比例或优惠金额；如有疑问，您可在购买前联系销售商进行咨询。 异常问题：商品促销信息以商品详情页“促销”栏中的信息为准；商品的具体售价以订单结算页价格为准；如您发现活动商品售价或促销信息有异常，建议购买前先联系销售商咨询关键词:- 关键词1
- 关键词2
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主体
- 上市月份 以官网信息为准
- 上市年份 2021年
- 首销日期 以官网信息为准
- 入网型号 JAD-AL50
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基本信息
- 机身宽度（mm） 72.8
- 机身厚度（mm） 8.5
- 机身材质分类 玻璃后盖；金属边框
- 机身长度（mm） 158.8
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数据接口
- 数据传输接口 WiFi热点；WIFI；NFC；蓝牙；WiFi Direct；OTG接口；红外
- NFC/NFC模式 支持卡模拟；支持（卡模式）；支持（读卡器模式）；支持（点对点模式）
- 充电接口类型 Type-C
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- 本商品质保周期为1年质保，在此时间范围内可提交维修申请，具体请以厂家准。 如因质量问题或故障，凭厂商维修中心或特约维修点的质量检测证明，享受7日内退货1日内换货，15日以上在质保期内享受免费保修等三包服务！(注:如厂家在商品介绍中有售后保障的说明
- 本商品质保周期为1年质保，在此时间范围内可提交维修申请，具体请以厂家准。 如因质量问题或故障，凭厂商维修中心或特约维修点的质量检测证明，享受7日内退货1日内换货，15日以上在质保期内享受免费保修等三包服务！(注:如厂家在商品介绍中有售后保障的说明,则此商品按照厂家说明执行售后保障服务。) 您可以查询本品牌在各地售后服务中心的联系方式，请点击这儿查询...... 品牌官方http://www.huawei.com/cn/售后服务电话：950800
产品类型： 原位插入细胞系
产品详情介绍
细胞系信息
● 细胞名称：hTERT-RPE1_mCherry/EGFP (人视网膜色素上皮细胞)
● 基因名称：zFYVE27/RTN2a
● 插入标签：EGFP /mCherry
● 插入位置：C端
● 细胞类型：单克隆
● 物种：人
● 细胞形态：贴壁生长，多边形
● 完全培养基成分：DMEM/F12+ 10% FBS＋1% P/S
● 传代比例：1：2~1：4
● 传代频次：2~3 天传代一次
● 支原体检测：阴性
基因编辑信息
● 构建方法
采用自主开发的原位基因标记(gene tagging)平台将通过细胞内源同源定向修复（HDR）路径在特定位点精准插入标记蛋白（荧光蛋白，报告基因，各类追踪纯化标签），为基因组修改提供了高效手段。该方法基于CRISPR/Cas9基因编辑技术、实现在细胞特定位点插入目的基因，而且产生的细胞为单克隆，表达均一，遗传稳定，为深入探索细胞功能提供了新策略。
● 应用场景
ok138cn太阳集团529原位插入细胞系，依托内源位点精准整合，保留天然基因调控背景。适配蛋白标签示踪、基因表达监测、蛋白互作与信号通路解析，支撑疾病机制探究、靶点验证与高通量药物筛选，提供高保真原生体外研究模型。
● 验证数据
细胞培养说明
● 细胞复苏
1）从液氮罐或者-80℃冰箱取出细胞冻存管，并迅速将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，可将冻存管置于干净的一次性PE手套内再置于水浴中。
2）待冻存管中液体融化后，立即取出，并用75%酒精纱布擦拭冻存管表面。
3）将冻存管置于生物安全柜中，并将冻存管中的液体转移到含有约9mL完全培养基的离心管中，300g，5min离心，弃上清。
4 ）用适量的完全培养基重悬细胞并转移到新的培养瓶中，并将细胞置于5% CO2、37℃恒温培养箱静置培养。
● 细胞转染
1）细胞准备：参考细胞传代流程进行细胞消化。用DPBS溶液洗涤2次，并进行细胞计数。根据计数结果，取相应细胞备用。
2） RNP准备：以5:1~10:1（sgRNA:Cas9）的比例准备RNP复合物，静置10分钟，电转时加入donor DNA模板。
3）电转步骤：用电转染仪完成 RNPs 的细胞核转染 ，参照 Thermo Fisher Neon 转染系统的使用说明完成 RNP 的细胞核转染实验。电转参数：1350V, 20ms, 2pulse。细胞数量：5×106/mL , 100 µl体系。
● 细胞筛选
1）细胞加压筛选：电转72h后通过puromycin 的作用筛选稳定整合细胞株，筛选浓度为8μg/ml。
● 抗性移除以及单克隆分选
● 细胞传代
当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例 1：2~1：4，2~3 天传代一次。具体操作如下：
1）吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入适量PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将PBS 吸出。
2）加入约1.0 mL 0.25%胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化 2~3 分钟，在显微镜下观察发现细胞变圆，轻轻拍打瓶壁观察到80%细胞从壁上脱落分离时即可加入约5ml完全培养基中和胰蛋白酶。并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落使细胞分散成单细胞悬液。（此处为T75培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。
3）将终止消化后的细胞悬液转移至干净的15ml离心管中，300g，5min离心，弃上清。
4）用适量的完全培养基重悬细胞，并按照传代比例（推荐传代比例1：2~1：4）转移到新的培养瓶中，并将细胞置于5% CO2、37℃恒温培养箱静置培养
● 细胞冻存
细胞汇合度达到80%-90%时可进行细胞冻存操作。自制冻存液成分：90%FBS+10%DMSO，为保证冻存细胞较高活力，冻存液最好提前配制并置于4℃冰箱预冷。
细胞冻存具体操作如下：
1）吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入适量PBS洗涤一次。
2）加入约1.0 mL 0.25%胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化 2~3 分钟，在显微镜下观察发现细胞变圆，轻轻拍打瓶壁观察到80%细胞从壁上脱落分离时即可加入约5ml完全培养基中和胰蛋白酶。并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落使细胞分散成单细胞悬液。（此处为T75培养瓶所用体积，可根据实际情况增减用量）。
3）将终止消化后的细胞悬液转移至干净的15ml离心管中，300g，5min离心，弃上清。
4）根据细胞沉淀量加入适量提前配制好并预冷的细胞冻存液（推荐1个T75培养瓶的细胞可加入3ml冻存液），轻轻吹打使细胞分散。
5）将细胞悬液转移至细胞冻存管中，1ml/管。冻存管需提前写好标签或者贴好标签。标签信息包含细胞名称，代次，冻存时间及操作人员姓名等。
6）将细胞冻存管置于细胞程序降温盒中，并将盒子置于-80℃冰箱中过夜。过夜后可将冻存管转移至液氮罐中长期保存。
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